抗铜绿假单胞菌外膜蛋白F单克隆抗体制备及夹心ELISA检测方法的建立
目的:制备抗铜绿假单胞菌外膜蛋白F(OprF)的单克隆抗体(mAb),并建立双mAb夹心ELISA检测方法.方法:利用分子生物学方法克隆OprF基因,诱导表达并纯化OprF.用OprF免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术制备特异性的mAb,并用ELISA法测定mAb的免疫活性;建立检测铜绿假单胞菌的双mAb夹心ELISA方法,并对其敏感性、特异性进行初步评价.结果:成功地克隆OprF基因,经诱导表达获得铜绿假单胞菌的OprF.通过杂交瘤技术筛选出4株mAb:6D8F7、2H2B6、3C2F5和7B5D9,经鉴定mAb 6D8F7可作为捕获抗体,mAb 785D9被HRP标记后可作为检测抗体,以这2株mAb建立的双mAb夹心ELISA方法重复性好、特异性强,敏感性高达到1×103集落形成单位(CFU/mL).检测的线性范围为1×103～108 CFU/mL.与传统的细菌分离方法比较,检测临床标本的符合率高达94.7%.结论:通过杂交瘤技术制备抗铜绿假单胞菌OprF的mAb,并建立了高特异性、高敏感性检测铜绿假单胞菌抗原的双mAb夹心ELISA方法,可用于临床检测铜绿假单胞菌的感染.
铜绿假单胞菌、外膜蛋白F、原核表达、单克隆抗体、ELISA
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R378.99+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
880-883
