抗人Id3蛋白多克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞内的定位研究

摘要：

目的:表达及纯化重组人分化抑制因子3(Id3)蛋白,制备兔抗人Id3多克隆抗体.方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化重组人Id3融合蛋白,以纯化Id3重组蛋白为免疫原,免疫新西兰家兔,制备兔抗人Id3多克隆抗体,通过亲合层析实验去除抗血清中非特异性成分,免疫双向扩散、间接ELISA及Western blot法检测抗体效价和特异性.用间接免疫荧光试验(IFA)对人乳腺上皮癌细胞(MCF7)、人前列腺癌细胞(PC-3M)、人肺腺癌细胞(A549)细胞内Id3表达进行定位研究.结果:SDS-PAGE电泳、Western blot分析证实,表达载体Id3/pET-32a在大肠杆菌BL21中经诱导可大量表达His-Tag Id3融合蛋白;表达产物通过镍离子亲和层析法纯化得到相对分子质量(Mt)为34 000的Id3融合蛋白;Id3重组蛋白免疫家兔获得的抗血清效价分别为1:8(双向扩散)和1:8 000(ELISA),Western blot分析表明抗体具有抗人Id3的良好特异性.IFA结果发现,A549细胞内Id3表达量很低;在MCF7和PC-3M细胞内,Id3呈高水平表达,且主要定位于核浆.结论:重组人Id3蛋白的表达纯化及抗人Id3多克隆抗体的研制为进一步研究该蛋白的功能及其临床应用研究提供了有利工具.

关键词：分化抑制因子3(Id3)、抗体、A549细胞

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分类号：R392.12

资助基金：江苏省"科教兴卫"医学重点人才基金课题RC2007117;南京军区医药卫生科研项目重点课题07Z032

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：871-873