microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响

摘要：

目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(1d3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响.方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞.荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定昔RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;M1Tr法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响.结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRld3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制.M1Tr和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P<0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发牛明显变化.结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导人靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础.

关键词：RNA干扰、microRNA、Id3、共转染、凋亡

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：江苏省"科教兴卫"医学重点人才基金课题RC2007117;南京军区医药卫生科研项目重点课题072032

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：852-855,857