mTSARG3真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

摘要：

目的:构建小鼠mTSARG3基因真核表达载体,转染小鼠精原细胞系GC-1,建立稳定转染mTSARG3的GC-1细胞系,利用流式细胞技术(FCM)进行初步功能研究.方法:应用RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mTSARG3的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到pGEM-T Easy载体中测序验证.随后,经Not Ⅰ和Hind Ⅲ酶切后将目的片段进一步克隆到pcDNA3.1 Hygro(-)真核表达载体中.将经过测序验证的pcDNA3.1 Hygro(-)/mTSARG3表达质粒转染GC-1细胞,通过潮霉素筛选建立mTSARG3稳定转染的GC-1细胞系.RT-PCR和Western blot检测mTSARG3在稳定转染的GC-1细胞系中的表达;FCM观察转染pcDNA3.1 Hygro(-)/mTSARG3重组质粒)对GC-1细胞周期和凋亡的影响.结果:成功构建了peDNA3-1 Hygro(-)/mTSARG3表达质粒,建立了稳定转染的GC-1细胞系.RT-PCR和Western blot检测结果发现,mT-SARG3在GC-1细胞系中成功表达.进一步通过FCM检测分析发现,转染mTSARG3可促进GC-1细胞增殖,抑制细胞凋亡.结论:mTSARG3真核表达载体的成功构建和稳定转染重组质粒GC-1细胞系的建立为进一步体外研究mTSARG3的功能奠定了基础.

关键词：mTSARG3基因、转染、GC-1 spg

所属期刊栏目：26

分类号：Q38(动物遗传学)

资助基金：教育部博士学科点新教师基金项目422201019

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：839-841,845