抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的:制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体(mAb),以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究.方法:用重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术进行细胞融合,经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆,获得稳定分泌抗人HPPCn mAb的细胞株.采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性;通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位.通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位.结果:得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,命名为W2-D5.经Ig亚类分析确定,该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类.间接ELISA检测表明,该抗体检测HPPCn的极限为0.1 μg/L;Western blot结果显示,该抗体能特异性识别HPPCn.细胞免疫荧光实验,证实了HPPCn蛋白定位在细胞核.通过肽库筛选及表位分析认为,该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13(IHLELRN).结论:成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb.

关键词：HPPCn、单克隆抗体、效价、噬菌体肽库

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家重大科学研究计划项目2006CB910803

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：774-776,782