ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析

摘要：

目的:构建ureI和ctB-ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况.方法:用pIRES-RD2真核表达载体分别在5'端连接ureI和ctB-ureI基因,经双酶切和测序鉴定正确后,相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察荧光标签,确定质粒的转染率;用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体,采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况.结果:成功构建了ureI和ctB-ureI的真核表达质粒pIPES-RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB-ureI,用此质粒转染HEK293T细胞48～72 h后,荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80%;用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性,表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近,ctB-ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外.结论:成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB-ureI,目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性.

关键词：尿素膜通道蛋白(ureI)、霍乱毒素B亚单位与尿素膜通道蛋白融合(CtB-ureI)、真核表达

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：四川省科技厅科技支撑项目2008SZ0025

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：764-766,770