人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定

摘要：

目的:构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体,并对其产物作初步鉴定.方法:利用分子克隆技术依次将G22,150插入到原核表达载体pET25b(+)中,经菌落PCR,双酶切验证并测序.阳性重组子转化入表达菌株E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,表达的重组蛋白经His-tag纯化试剂盒纯化后复性.用Western blot方法鉴定G22-I50双价蛋白的表达,ELISA方法分析其蛋白活性,并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况.结果:构建的原核表达载体pET25b-G22-I50经测序验证,序列正确.双价蛋白G22-150以包涵体形式高效表达,经纯化后纯度达90%以上.Western blot鉴定表达的蛋白相对分子质鼍(Mr)约42 000,与预期相符.ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性,并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖.结论:成功获得了有活性的双价抗独特型抗体,为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础.

关键词：鼻咽癌、抗独特型抗体疫苗、双价、原核表达

所属期刊栏目：26

分类号：R739.6(肿瘤学)

资助基金：中南大学创新基2009bsxt059

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：667-670