活体电穿孔法辅助HE4基因免疫小鼠制备单克隆抗体
目的:采用电穿孔辅助DNA免疫方法制备小鼠抗人附睾蛋白4(HE4)单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行鉴定.方法:利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从卵巢癌患者组织中获得人HE4基因编码序列,将其亚克隆至pPICZαA表达载体中并测序鉴定.采用活体电穿孔法免疫BALB/c小鼠.单抗制备采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人HE4 mAb的杂交瘤细胞株.采用Western blot,Ig亚型分析和mAb表位分析等对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人HE4 mAb的杂交瘤细胞株,命名为1-7-C和3-12-C.ELISA和Western blot结果均显示本实验获得的2株mAb能够特异识别有天然构象的HE4蛋白,2株mAb的Ig亚类均为IgM,轻链均为λ链.结论:成功地构建了pPICZαA-HE4表达载体,并获得2株鼠抗人HE4杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别HE4蛋白.
卵巢癌、HE4、活体电穿孔、DNA免疫、杂交瘤、单克隆抗体
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Q813.2(生物工程学(生物技术))
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
660-662
