小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究
目的:构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCxCR3,研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应.方法:取1只雌性BALB/c小鼠(7周龄),尾静脉注射0.5 mg Con A/只,12 h后取其脾脏,研磨成细胞悬液后,分离获得脾脏细胞;用含5万U/L人IL-2的RPM11640培养基培养3 d;收集细胞,TRlzol一步法抽提总RNA,RT-PCR扩增小鼠CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞,重复感染3次,筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株.采用流式细胞术(FCM)和RT-PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定.Transwell 分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP-10作用下的迁移能力.结果:构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3,其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97.0%;该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移,迁移率为4.356%.结论:L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础.
CXCR3、趋化因子、基因转染、逆转录病毒、稳定表达
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R392.11
国家科技重大专项资助项目2009ZX09103-705
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
627-630
