人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

摘要：

目的:构建人hcGB真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达人hCCβ的小鼠黑色素瘤细胞系.方法:采用PCR方法扩增出人hCCβ全长基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体plRES-neo中,并加入酶切位点和6 ×His标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-hCGβ-(His)6.利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染人小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆.RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达.结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-hcGB-(His)6重组体构建正确,最终建立的表达人hCGg基因的B16细胞系阳性率高于90%.结论:成功构建了真核表达载体pIRES-neo-hCGβ-(His)6,建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因.该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础,为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础.

关键词：hCGβ、稳定转染、小鼠黑色素瘤细胞、肿瘤免疫治疗

所属期刊栏目：26

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02A237:2007AA02Z451;国家自然科学基金资助项目30772002

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：623-626