牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:克隆牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB基因、原核表达并制备牙龈卟啉菌外膜蛋白:RagB多克隆抗体.方法:根据牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的DNA序列,设计特异性引物并经PCR扩增其基因.扩增产物经鉴定和测序分析后,与质粒pET-32a(+)重组形成pET-32a-ragB,继而转化大肠埃希菌.LPTG诱导重组蛋白的表达,再通过Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定;获得的重组蛋白行常规家兔免疫,以制备多克隆抗体,并应用ELISA测定抗体效价.结果:PCR扩增获得编码区全长为1 506 bp可编码501个氨基酸的RagB基因,测序结果与GenBank公布的序列(AJ130872)完全一致;构建了pET-32a-ragB原核表达载体,获得了高表达的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blot表明具有较高的纯度;ELISA结果显示,特异性兔抗RagB的多克隆抗体效价为1×105.结论:在成功构建牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB原核表达载体的基础上,高效表达及纯化了RagB融合蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体.为进一步开展牙龈卟啉菌疫苗研究、建立牙龈卟啉菌感染的实验室诊断方法奠定了基础.
牙龈卟啉菌、外膜蛋白RagB、原核表达、多克隆抗体
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30871193,30972748;江苏省社会发展基金资助BS2007041;江苏省六大高峰人才资助项目07-B-34;江苏大学大学生科研立项08A018
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
572-574
