小鼠PDL-1胞外区基因表达、纯化及其多克隆抗体的制备
目的:原核表达并纯化小鼠PDL-1膜外区(以下简称mPDL-1)蛋白,制备其多克隆抗体.方法:原核表达质粒pET28 a(+)/mPDL-1转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测.利用切胶回收的方法纯化蛋白.使用纯化蛋白免疫日本大耳白兔3次后,分离抗血清,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.用其制备的多克隆抗体通过细胞免疫荧光方法(CIF)和流式细胞术(FCM)检测表达PDL-1基因的B16细胞.结果:诱导性表达并纯化了mPDL-I重组蛋白,得到相对分子质量(尬)约30 000的mPDL-1蛋白.纯化蛋白免疫动物后,产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:1 562 500).CIF和FCM结果显示抗血清与肿瘤细胞表面PDL-1有高度的特异性结合活性.结论:成功获得高纯度的mPDL-1重组蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的抗体,为将mPD-L1蛋白及抗体用于PDL-1的生物学研究及抗肿瘤治疗的实验研究奠定了基础.
小鼠PDL-1、蛋白表达、抗体、免疫原性
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R392.11
湖北省自然科学基金资助项目2008CDB118;三峡大学研究生科研创新基金项目2009-36
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
569-571
