重组人颗粒溶素的纯化及其单克隆抗体的制备

摘要：

目的:纯化原核系统表达的颗粒溶素(GNLY),并制备其单克隆抗体(mAb).方法:用Ni亲和层析纯化重组人GNLY,用其免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备相应的mAb.mAb纯化后,用间接ELISA法测mAb的效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸盐洗脱法测定mAb的相对亲和力指数,并进行Ig亚类、特异性及杂交瘤细胞分泌mAb的稳定性检测.结果:经Ni亲和层析纯化的可溶性GNLY融合蛋白,其纯度和含量分别为95%和0.8 g/L.共筛选出能稳定分泌抗人GNLY mAb的杂交瘤细胞4株,分别为6C8、9C6、5G7和5E5.4株杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价分别为1:100～1:3 200和(0.1～8)×10-4,5E5 mAb的Ig亚类为IgM,其余3株mAb均为IgG1.结论:成功地纯化人GNLY融合蛋白.以其为免疫原制备的鼠抗人GNLY mAb,为实验室及临床研究奠定了一定的基础.

关键词：颗粒溶素、纯化、单克隆抗体

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：563-565