结核分枝杆菌毒力分泌基因Rv3872重组卡介苗的构建及表达

摘要：

目的:构建结核分枝杆菌Rv3872的原核重组表达质粒pET-3872并对其进行表达及鉴定.构建表达结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3872即PE35的重组卡介苗.方法:应用PCR技术扩增Rv3872基因,定向克隆入pET32a(+)并转化E.coli BL21(DE3)菌株,测序后用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测及鉴定.用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.构建重组穿梭表达质粒pMV-3872,将重组质粒电穿孔进入卡介苗,对重组卡介苗进行诱导表达用SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白.结果:表达融合蛋白的pET-3872质粒构建成功,重组蛋白经Western blot检测出特异性阳性信号.重组卡介苗BCG-3872构建成功,热诱导表达后经SDS-PAGE和Western blot,在培养上清中检测到目的蛋白.结论:成功构建了重组质粒pET32a(+),并在大肠杆菌中表达了PE35蛋白,有利于进一步研究Rv3872基因功能.本研究还对表达结核分枝杆菌蛋白PE35的重组卡介苗进行了鉴定,为进一步研究该重组卡介苗的免疫功能奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、Rv3872基因、表达、重组卡介苗

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金资助项目30872257;国家传染病重大专项2008ZX10003-013

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：539-542