T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究
目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础.方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用Realtime PCR和Western blot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;Realtime PCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CDS0、CD86与MHC Ⅱ类分子表达情况.结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CDSO、CD86及MHC Ⅱ类分子表达下调,IFN-γ mRNA水平显著下降.结论:成功地构建了T-bet shRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能.
T-bet、小发卡结构RNA、真核表达、树突状细胞
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R392.12
国家自然科学基金资助项目30871193,30972748;江苏省大学生创新计划资助2007-09
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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