人MICA*008等位基因预筛选及其真核表达载体的构建与表达
目的:应用序列特异性PCR技术(PCR-SSP)分析不同细胞系中MICA*008等位基因特异性位点,筛选出人MICA*008基因型,并构建其真核表达载体.方法:PCR-SSP技术分析本实验室保存的多种人源性细胞系中多态性基因MICA的特异性位点,预筛选出包含MICA*008等位基因的细胞系,应用RT-PCR扩增MICA*008基因片段,随后克隆到pcDNA3(+)真核表达载体,用经过测序、鉴定的pcDNA3(+)/MICA*008质粒转染结肠癌细胞系sw480,通过流式细胞术检测MICA膜蛋白表达水平.结果:预筛选出包含MICA*008基因型的细胞系,成功构建了pcDNA3(+)/MICA*008质粒,pcDNA3(+)/MICA*008转染sw480细胞系后,其MICA膜蛋白表达水平明显提高.结论:验证了应用PCR-SSP技术对细胞系中对特定MICA等位基因预筛选的可行性,成功构建了多态性MICA基因中MICA*008等位基因的真核表达载体pcDNA3(+)/MICA*008并转染结肠癌细胞系sw480,为后续体外研究MICA*008在结肠癌及其他肿瘤的作用奠定了基础.
MICA、真核表达载体、结肠癌细胞
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R392.11
国家自然科学基金资助项目3203022
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
450-452
