汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定

摘要：

目的:构建含汉坦病毒核蛋白(NP)氨基端编码基因S0.7,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒.方法:依据GenBank序列,分别合成CAG序列及WPRE序列,插入S0.7-pShuttle中,构建含S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE.采用PI-Sce I和I-Ceu I限制性内切酶将该片段克隆人腺病毒DNA,得到重组腺病毒DNA Adeno-S0.7-CAG-WPRE,使用Pac I线性化后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒.感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物.结果:转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE通过测序证明构建正确,纯化重组腺病毒滴度达1013 pfu/L.免疫荧光结果表明,重组腺病毒感染的HEK293细胞被抗汉坦病毒NP的特异性mAb 1A8所识别.结论:成功地构建了含汉坦病毒S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒,本实验为进一步研制汉坦病毒基因疫苗奠定了良好的基础.

关键词：汉坦病毒、S0.7基因、CAG启动子、WPRE、腺病毒

所属期刊栏目：26

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02A225;军队攻关课题资助项目08G112;国家自然科学基金资助项目30972756

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：420-422,430