HIV-1 nef基因的克隆及原核表达研究
目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件.方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef.经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E. coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物.结果:PCR扩增获得618 bp DNA片段,酶切鉴定结果表明HIV Nef基因已克隆入原核表达载体pET24a(+)中,测序证明序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组菌诱导后可表达相对分子质量(Mr)符合预期的融合蛋白.0.1 mmol/L IPTG在37℃诱导6 h为最佳表达条件,重组蛋白表达量可由15.8%增加到43.9%.结论:在大肠杆菌中成功地表达了HIV Nef蛋白,并初步获得了最优化的表达条件.
人免疫缺陷病毒Ⅰ型、Nef蛋白、原核表达
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R392.11
上海市青年科技启明星计划资助项目06QA14017
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
348-350
