TAP1真核表达载体的构建及其对GES-1细胞HLA-I分子表达的影响

摘要：

目的:构建抗原加工相关转运蛋白TAP1真核表达载体,并观察其对HLA-I分子表达的影响.方法:采用基因重组技术,构建含人TAP1基因全长的pcDNA3.1/V5-His-TAP1真核表达质粒,并采用细胞转染、RT-PCR、Western blot以及流式细胞术(FCM)观察TAP1转染对胃黏膜上皮(GES-1)细胞HLA-I分子表达的影响.结果:以人外周血单个核细胞总RNA为模板,经RT-PCR反应获得人全长TAP1基因,以pcDNA3.1/V5-His B为载体,经酶切、连接、转化等基因重组技术,构建了含人TAP1基因全长的pcDNA3.1/V5-His-TAP1质粒,并经测序结果证实.以GES-1作为靶细胞进行转染,经RT-PCR和Western blot证实,转染后TAP1基因表达明显增加,细胞适于所构建的TAP1质粒的转染.进一步检测了TAP1转染对GES-1细胞HLA-I类分子表达的影响.结果发现,TAP1转染组HLA-A、HLA-B、HLA-C(重链)在mR-NA水平表达明显增加,β2m(轻链)mRNA水平无明显影响.FCM及Western blot检测结果表明,TAP1转染可以上调HLA-I蛋白的表达.结论:成功构建了TAP1真核表达质粒,细胞转染后TAP1表达的增加,可引起细胞表面HLA-I分子表达的相应增加,从而证实了TAP1在HLA-I抗原表达以及抗原递呈途径中的重要作用.

关键词：HLA-I分子、TAP1、GES-1细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：河北省自然科学基金资助项目C2007000819

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：329-332