热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控

摘要：

目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用.方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4bcDNA的N-端加入Flag标签.将PCR产物经Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pull down实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b.结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中.pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60 000的蛋白.进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b.结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路.

关键词：热休克转录因子4、晶状体、MAP激酶P38、磷酸化

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金资助项目30871299

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：325-328