抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选

摘要：

目的:构建和筛选能高效、特异性抑制Coronin-1基因表达的siRNA表达载体.方法:提取鼠巨噬细胞总RNA,RT-PCR扩增Coronin-1基因目标序列,克隆入pSEB-HUS真核表达质粒,构建pSEB-HUS-C重组质粒.将设计、合成的3条siRNA及阴性对照分别克隆入pSEB-HUS-C,构建重组pSEB-HUS-C1、pSEB-HUS-C2、pSEB-HUS-C3及pSEB-HUS-CN质粒.将干涉质粒瞬时转染A549细胞,通过绿色荧光信号观察、实时定量PCR和Western blot法检测其对Coro-nin-1基因表达的影响.结果:经双酶切及测序证实,所构建siRNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符.经瞬时转染A549细胞后,其中的pSEB-HUS-C3能明显抑制Coronin-1mRNA的表达和Coronin-1蛋白的合成,抑制率分别是75.9%和75.1%.结论:成功构建并筛选出高效、特异性抑制Coro-nin-1表达的siRNA表达载体,为进一步研究Coronin-1在巨噬细胞中的作用奠定基础.

关键词：Coronin-1、RNA干扰、siRNA质粒载体、结核分支杆菌

所属期刊栏目：26

分类号：R378.91+1;R392.11(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金资助20070631006

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：318-321