介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用

摘要：

目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础.方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF).首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其对NK-92细胞穿孔素mRNA和蛋白表达水平的影响.结果:转染pShuttle-shPF(1-3)的干扰效率分别为(74.2±4.1)%、(43.2±3.2)%、(61.7±2.6)%.干扰效果明显,其中又以pShuttle-shPF1的干扰效果最佳.成功包装Ad-shPF1,感染NK-92细胞,mRNA表达水平降至对照组的32%;Western blot分析表明Ad-shPF1处理后可在蛋白水平上明显抑制PF的表达.结论:PF shRNA重组腺病毒可以在mRNA和蛋白水平抑制NK-92细胞中PF的表达.

关键词：穿孔素、腺病毒NK-92细胞、短发夹RNA

所属期刊栏目：26

分类号：R392-33

在线出版日期：2010-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：291-293