D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立
目的:建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法.方法:用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性(回收率)、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较.结果:包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1:4 000和1:5 000;检测的线性范围为(28～1180)μg/L,检测限为4.6μg/L.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%～105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性.结论:该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.
D2蛋白酶、ELISA双抗体夹心法、定量检测
26
R392.11
国家重点基础研究发展计划973资助项目2004CCA02400
2010-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
278-280
