人UNC5CL原核蛋白的表达及多克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的:构建UNC5CL基因的原核表达载体,纯化GST-UNC5CL融合蛋白,并以其为抗原免疫家兔,制备抗人UNC5CL多克隆抗体,并鉴定其反应性和特异性.方法:用PCR方法扩增UNC5CL基因(表达其280-518位氨基酸)片段并克隆至pGEX-4T-2原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21诱导融合蛋白GST-UNC5CL(aa 280-518)表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化,免疫家兔制备抗血清,再采用ELISA、Western blot和免疫组化的方法检测抗体的效价及特异性.结果:测序证实原核重组质粒构建成功;经IPTG诱导,可表达M_r为52 000的GST-UNC5CL(aa280-518)的融合蛋白;谷胱甘肽亲和层析柱纯化的融合蛋白免疫家兔制备的抗血清经Western blot和免疫组化检测证实可识别目的蛋白.结论:制备了兔抗人UNC5CL的多克隆抗体,且抗体对内源性UNC5CL具有较好的反应性和特异性,为进一步研究UNC5CL的功能奠定了基础.

关键词：UNC5CL、融合蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：26

分类号：Q78;R392-33(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30600734;教育部留学回国人员科研启动基金资助项目2007年

在线出版日期：2010-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：242-245