人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化

摘要：

目的:探讨人FcγR Ⅰ(huFcγR Ⅰ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性.方法:PCR方法从人的外周血自细胞中扩增出huFcγR Ⅰ ORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγR Ⅰ-T中扩增huFcγR Ⅰ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1.构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定.结果:扩增到了huFcγR Ⅰ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγR Ⅰ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致.IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%.SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(M_r)56 700与理论预期值一致.Western blot结果显示原核表达的huFcγR Ⅰ胞外区蛋白与人IgG特异亲和.结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合.

关键词：FcγRⅠ重组蛋白、原核表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金重点资助项目30730068;国家重点基础研究发展计划973资助项目2005CB523200

在线出版日期：2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：178-180