人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

摘要：

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性.方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5El)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区fCDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基.通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达.表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白.对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测.结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性.结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础.

关键词：单链抗体、免疫原性、人源化、炭疽

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家高科技研究发展计划863资助项目2006AA02A232

在线出版日期：2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：145-148