SA/mIL15双功能融合蛋白的制备及其生物学鉴定
目的:制备链亲和素(SA)标记的鼠白细胞介素-15融合蛋白SA-miL15和mIL15-SA,并研究其生物学功能.方法:构建pET24a-SA-L-mIL15和pET21 a-mIL15-L-SA重组表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,对所表达的蛋白分别采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和阴离子交换(DEAE)层析进行纯化,透析复性.MTT法检测融合蛋白对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析融合蛋白对生物素化的小鼠前列腺癌(RM-1)细胞表面锚定修饰效率.结果:SA-mIL15和mIL15-SA在大肠杆菌中实现了高效表达,约占细菌总蛋白的20%.制备的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即:mIL15促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性和SA介导的高效结合至表面已生物素化的RM-1细胞的功能(表面锚定修饰效率均大于95%).其中,SA-mIL15双功能融合蛋白促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞增殖活性为1×10~6IU/mg,mIL15-SA活性为2×10~5IU/mg.结论:SA/mIL15双功能融合蛋白具有双重活性,为mIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制奠定了基础.
白细胞介素15、链亲和素、融合蛋白、锚定文献标识码]A
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Q816(生物工程学(生物技术))
国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02Z4CA;浙江省自然科学基金资助项目R2080407;浙江省科技计划重大专项资助项目2008C14082
2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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