人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物.方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α.继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1 500 bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET028a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达.采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平.结果:①成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系.②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性.结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件.

关键词：人细胞角蛋白8CK8、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金资助项目330470089

在线出版日期：2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：41-43