转录因子JunB在肝癌细胞中的表达、定位及其转录作用研究

摘要：

目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用.方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定.而后将测序正确的基因片段分别亚克隆入pcDNA3.1(-)和pEGFP-C3真核表达载体中,获得重组载体pcDNA-JunB和pEGFP-JunB.采用脂质体瞬时转染法分别将pEGFP-JunB和pcDNA-JunB导入肝癌细胞HepG_2中,用Western blot法观察外源JunB在肝癌细胞中的表达;用荧光显微镜观察其在细胞内的定位;用双荧光素酶报告基因检测法观察JunB对下游靶分子VEGF的转录调控作用.结果:分别构建表达转录因子JunB和增强型绿色荧光蛋白融合JunB分子的重组表达质粒,并经Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切鉴定正确.将重组表达质粒转染HepG_2细胞后,经免疫印迹法和荧光显微镜检测,可见外源导人的JunB分子在细胞中成功表达并特异性定位定位于细胞核内.荧光素酶报告系统检测显示:JunB对VEGF分子在转录水平具有明显的激活作用.结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因和转录因子JunB基因融合表达的重组质粒.在肝癌细胞中观察到外源瞬时表达的JunB定位于细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性.报告基因结果显示其对肿瘤血管生成密切相关的分子VEGF发挥转录激活的作用,提示JunB分子有可能成为抑制肝癌血管生成的新靶点.

关键词：JunB、转录调控、肝癌细胞、VEGF

所属期刊栏目：26

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30873006,30901771;第四军医大学"青年英才支持计划"资助2009

在线出版日期：2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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