截短型人骨保护素在CHO-DHFR-细胞中的表达及活性测定

摘要：

目的:构建截短型人骨保护素(hTOPG)哺乳动物表达载体pcDNA3.1/DHFR-hTOPG, 实现其在CHO-DHFR-细胞中的高效表达, 获取生物活性较高的重组蛋白.方法:利用基因重组技术构建重组表达载体pcDNA3.1/DHFR-TOPG, 按LipofectamineTM 2000试剂盒说明书转染CHO-DHFR-细胞, 以含50 mL/L透析血清的IMDM培养基培养, 氨甲喋呤(MTX)加压筛选高表达细胞株, ELISA法和RT-PCR法测定重组蛋白和基因的表达, 并采用破骨细胞样细胞(OLC)诱导分化抑制实验测定重组蛋白的体外活性.结果:重组蛋白的表达量最高可达6 mg/L·72 h , 且能够明显抑制OLC生成(P<0.05).结论:截短型人OPG在CHO-DHFR-细胞中成功高效表达, 并具有良好的生物学活性, 为进一步的实验研究和临床应用提供了基础.

关键词：骨保护素、CHO-DHFR-细胞、表达、活性分析

所属期刊栏目：25

分类号：R392.6

资助基金：天津市自然科学基金重点项目013803511

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1002-1004