HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定

摘要：

目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白, 构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体, 获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性.方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段, 并克隆至表达载体pET22b(+)中, 利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达, 产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化. 采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响.结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段, 成功构建重组质粒pET22b(+)-HAPO, 其表达的融合蛋白以可溶状态存在, 表达量占菌体总蛋白的10%, 经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%.活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性.结论:可溶性表达了HAPO蛋白, 并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用.

关键词：促血液血管细胞生长素、可溶性表达、分离纯化、人脐静脉内皮细胞

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划资助项目2006AA02A110;国家自然科学基金资助项目30570358;天津市自然科学基金资助项目08JCZDJC19100,09JCZDJC17300

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：991-993,997