人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能.方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59 cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体.重组融合蛋白GST-hsCD59由经IPTG诱导的大肠杆菌BL21表达后纯化并鉴定.用pVAX-1-hCD59质粒免疫家兔并用纯化的GST-hsCD59融合蛋白加强免疫制备兔抗人CD59多克隆抗体并测定其效价.结果:成功构建人CD59真核表达质粒pVAX-1-hCD59和原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59.融合蛋白GST-hsCD59在大肠杆菌中高效表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值一致.制备的兔抗人CD59多克隆抗体效价为1:3 200.结论:成功地构建了重组真核表达质粒pVAX-1-hCD59及原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59,获得了兔抗人CD59多克隆抗体,这将有助于我们深入研究CD59在人类疾病中的生物学功能.

关键词：人CD59、克隆、多克隆抗体

所属期刊栏目：25

分类号：R392.7

资助基金：国家重大传染病专项基金资助2008ZX10003-005

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：924-926