5HRE联合PCEA调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建

摘要：

目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体.方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因.利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段.选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(PCMV IE).将上述基因片段与去除了PCMV IE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TEST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体.结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因.构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符.将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误.结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TEST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础.

关键词：缺氧反应元件、癌胚抗原、超抗原、CEA-阳性肿瘤、免疫基因治疗

所属期刊栏目：25

分类号：R656.9(外科学各论)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30672070,30400430

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：863-865