草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

摘要：

目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200～1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景.

关键词：免疫球蛋白、间接ELISA、单克隆抗体、BALB/c小鼠

所属期刊栏目：25

分类号：Q813.2(生物工程学(生物技术))

资助基金：浙江省科技厅重点项目2007C22052

在线出版日期：2009-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：808-810