Rh抗原Fab抗体库的构建与筛选

摘要：

目的:构建抗体库并筛选Rh抗原的Fab抗体.方法:收集5份血清中抗Rh抗体效价在1:256～512的人淋巴细胞, 提取RNA, 用多对引物PCR扩增VH、 Vκ、 Vλ基因, 并分别从pComb3xTT和pComb3xλ噬粒中扩增CH1、 Cκ、 Cλ, 通过重叠PCR, 构建重链Fd基因及完整的kappa、 Lamda轻链, 并进一步重叠PCR, 获得Fab抗体片段.Fab经酶切、连接并电转化到噬菌体抗体表达载体pComb3xSS中, 构建获得抗Rh的Fab抗体库, 经4轮Rh(-)/ Rh(+)红细胞阴/阳淘筛, 获得的阳性克隆分别进行血凝试验、 Western blot分析及测序鉴定.结果:构建获得总库容为7.4×106的Fab抗体库, 并从中筛选得到1株能特异结合Rh抗原的Fab抗体.结论:应用基因工程抗体技术, 成功获得了1株能与Rh(+)红细胞特异凝集的Fab抗体, 为制备能用于临床的特异性强、效价高, 并具有自主知识产权的Rh抗体打下基础.

关键词：Rh血型、基因工程抗体、噬菌体抗体库、Fab

所属期刊栏目：25

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：苏州市科技局自然科学基金SSY0616

在线出版日期：2009-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：805-807,810