10.3321/j.issn:1007-8738.2009.08.024
人源性胃癌单链抗体库的构建
目的: 构建人源天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体(scFv)库.方法: 采集人新鲜外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体VH和VL基因,同时扩增作为间隔区的人抗体CK基因;采用重叠延伸PCR(简称SOE PCR)技术连接VH-VL-CK基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接T-Vector转化E.coli DH5α大肠杆菌,蓝白筛选,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装.结果: 成功构建了库容量达3.1×1013的人源性胃癌核糖体展示scFv库.结论: 构建的大容量人源性胃癌核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选多种特异性人源抗体的实验平台,为开发治疗性人源抗体奠定了很好的实验基础.
核糖体展示技术、SOE、PCR、单链抗体(scFv)库、胃癌
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R392.11
国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA10A208-1-4;甘肃省科技公关项目2GS064-A43-020-21
2009-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共3页
738-739,742
