一种高效扩增人T细胞受体β链可变区基因的方法建立

摘要：

目的:建立一种高效扩增人T细胞受体(TCR)β链可变区(Vβ)基因的方法.方法:根据TCR Vβ26个亚家族基因序列特点设计扩增Vβ基因的上游内引物34条、上游外引物37条, 并将内、外上游引物各分为8个简并组.在恒定区(C区)设计下游内、外和测序引物各1条以及扩增Cβ基因的上游引物1条.提取细胞RNA, 用PolyA介导反转录后, 采用巢式PCR扩增正常人CD8 T细胞TCR Vβ26个亚家族基因, 并用Jurkat T淋巴瘤细胞作为对照.用T-easy载体克隆RT-PCR 产物, 对克隆基因进行测序.结果:从正常人的CD8 T细胞中扩增到所有TCR Vβ亚家族基因, 克隆后测序与相应的参考序列同源.从Jurkat细胞扩增出TCR Vβ8基因, 经测序验证与文献报道一致, 且最少可从10个细胞提取的RNA模板中扩增成功.结论:建立的巢式RT-PCR方法可以高效、广谱地扩增人TCR Vβ基因, 为进一步进行抗原特异性细胞毒T淋巴细胞的TCR克隆和功能研究打下了良好基础.

关键词：CD8T细胞、T细胞受体(TCR)、反转录PCR、基因克隆

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分类号：R392.11

资助基金：军队"十一五"医药卫生科研杰出人才项目06J024;国家自然科学基金资助项目30771898

在线出版日期：2009-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：644-647