兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的: 制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb), 并对抗体进行特性鉴定.方法: 以人正常肝cDNA文库为模板, 构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His).CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb, 辛酸-硫酸铵法纯化抗体, 采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性.结果: CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达.兔抗人CES1 pAb效价为1∶ 64 000.Western blot鉴定表明, 该抗体可识别重组人CES1蛋白, 也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基.免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白.结论: 成功地制备了兔抗人CES1 pAb, 该抗体可应用于ELISA、 Western blot、免疫组化等实验, 为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具.

关键词：CES1、重组蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

资助基金：黑龙江省政府博士后启动金LRB04-196;黑龙江省教育厅科学技术研究项目资助11531083;哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目2008RFXXS018;黑龙江省卫生厅科研课题2007-471

在线出版日期：2009-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：516-518