10.3321/j.issn:1007-8738.2009.06.009
小鼠visfatin抗体的制备及应用
目的: 制备高效价抗visfatin抗体, 探测visfatin在前脂肪细胞成脂分化过程中在空间上表达情况.方法: 克隆鼠内脂素visfatin基因的蛋白编码区全长序列, 构建其原核表达载体pET28a-visfatin, 然后在E.coli(BL21)中诱导大量以包涵体形式表达, 提取包涵体并用Ni-NTA 亲和层析柱纯化蛋白, 并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.以纯化后的抗血清为一抗, Western blot检测小鼠肝、肌肉等组织中visfatin的分布.结果: SDS-PAGE及Western blot显示原核表达载体pET28a-visfatin在大肠杆菌中诱导表达, 融合蛋白能够被抗his mAb识别.免疫新西兰大白兔获得抗体效价在1∶ 25 600以上.结论: 用制备得到的抗体对小鼠心、肝、肺、脾、脂肪、肌肉组织样品做Western blot鉴定, 结果表明visfatin在各组织中均有表达, 其中脾和脂肪组织中表达量高于其他组织.
内脂素、原核表达、抗血清制备
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30270515
2009-06-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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