鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:以人单核细胞cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX- 4T-1-CD20 (即CD20-GST) 和pET-32a-CD20(即CD20-His).以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.结果:CD20-GST 和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20 mAb与CD20蛋白具有良好的反应性.结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础.

关键词：CD20、原核表达、融合蛋白、抗体制备

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分类号：R392.11

资助基金：黑龙江省教育厅振兴老工业基地重大科技项目1151zgd11;哈尔滨市科技创新人才研究专项基金项目RC2006XK003010;黑龙江省生物医药工程重点实验室研究基金2004-001;哈尔滨医科大学医学基础学科青年科学基金项目060043

在线出版日期：2009-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：454-456