抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用

摘要：

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定.方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His).在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ern blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性.结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体.Western blot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白.免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合.结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础.

关键词：hCE-Ⅱ、原核表达、融合蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

资助基金：黑龙江省卫生厅科研课题2007-471;黑龙江省博士后启动金LRB04-196;黑龙江省教育厅振兴老工业基地重大科技项目1151zgd11;哈尔滨市科技创新人才研究专项基金项目RC2006XK003010;黑龙江省生物医药工程重点实验室研究基金2004-001;哈尔滨医科大学医学基础学科青年科学基金项目060043

在线出版日期：2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：158-160,163