NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定

摘要：

目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体.方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒, 再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内, 与辅助质粒pAAV/Ad、 腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞, 通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体, 收集病毒上清, Dot blot法测定其滴度.MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体, 对HepG2细胞存活率的影响.结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因; 得到高滴度的(3.14×1015 pfu/L)重组腺相关病毒表达载体.NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体, 对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用, 与对照组比较, 处理组细胞的存活率明显降低.结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体, 为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础.

关键词：NT4-Apoptin-HA2-TAT、重组腺相关病毒、肿瘤、融合基因

所属期刊栏目：24

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：2006年教育部博士点专项科研基金20060698055

在线出版日期：2008-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：754-756