抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备分泌型的磷脂酶A2 G13(group XIII secreted phospholipase A2,PLA2G13)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特性鉴定.方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PLA2G13(即PLA2G13-GST)和pET-32a-PLA2G13(即PLA2G13-His).PLA2G13-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb和鼠mAb.采用Western blot鉴定兔抗人PLA2G13 pAb的特异性.采用Western blot和Immunohistochemistry鉴定鼠抗人PLA2G13 mAb的特异性.结果:PLA2G13-GST和PLA2G13-His融合蛋白在均大肠杆菌中以包涵体形式大量表达.Western blot鉴定表明,兔抗人PLA2G13 pAb可特异地识别HepG2细胞系中相对分子质量(Mr)约19700的蛋白,与文献报道中PLA2G13的实际Mr相符.通过筛选共获得8株可稳定分泌抗PLA2G13的杂交瘤细胞株,Western blot鉴定表明6株可识别重组人PLA2G13蛋白,免疫组织化学鉴定显示2株可特异性识别正常肝组织中的PLA2G13蛋白.结论:成功地制备了抗人PLA2G13兔pAb和鼠mAb,为进一步研究PLA2G13的功能提供了特异性检测工具.

关键词：PLA2G13、原核表达、融合蛋白、抗体制备

所属期刊栏目：24

分类号：R392.11

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2006CB910803;国家自然科学基金30600738

在线出版日期：2008-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：389-392