肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达

摘要：

目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因.方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/EPVTKAEML-HSP70.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果.结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0 kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端.经BamH I、Xho I酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72 000处有表达量明显增多的蛋白条带.结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70的融合基因.

关键词：肝肿瘤/免疫学、抗原、肿瘤/遗传学、表位、热休克蛋白类70/遗传学、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30400167

在线出版日期：2008-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：113-114,118