人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法:将亚克隆构建的pET28a(+)/DcR3重组表达质粒转化人大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定.结果:pET28a(+)/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mτ)为33 000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%.Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性.纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6.结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础.

关键词：DcR3、原核表达、蛋白质纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：23

分类号：Q786;R392(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30370617;吉林省科技发展计划20030418-01

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1160-1162