人源抗癌胚抗原单克隆抗体的获得与鉴定

摘要：

目的:获得抗癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体(mAb).方法:采用特殊的5轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的人源CEA抗原淘筛本室构建的人源特异性噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的CEA噬菌体抗体,酶切鉴定插入的抗体基因.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因,构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗CEA抗体Fab段,ELISA、Westem blot检测抗体免疫学活性,测序分析抗体基因.结果:筛选出4株与CEA抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体.切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中无统计学意义.可溶性抗体与人CEA抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应.Western blot显示在略大于相对分子质量(Mr)45 000处有一明显条带,与Mr48000的Fab大小一致.DNA测序分析表明Fab段VH属于IgG VH3基因家族,VL属于Vk1基因家族.结论:抗CEA噬菌体抗体库的构建和人源抗CEA mAb的制备,为CEA阳性表达肿瘤的靶向治疗奠定基础.

关键词：噬菌体抗体库、癌胚抗原、人源性单克隆抗体

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分类号：R392.11

资助基金：江苏省应用基础研究计划项目BK2001008

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1157-1159