人IL-1RⅡ基因腺病毒载体的构建及在子宫内膜异位症细胞中的表达

摘要：

目的:利用AdEasy XL系统,构建并鉴定IL-1RⅡ基因重组腺病毒载体,并在子宫内膜异位症(EM)细胞中表达.方法:PCR扩增含有IL-1RⅡ全长cDNA的片段,亚克隆到pShuttle-CMV穿梭质粒,经酶切和测序验证无误后,再经电转化与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选、酶切鉴定以及再次测序验证无误后得到阳性的重组质粒,经Pac Ⅰ酶切线性化再在293细胞中进行包装扩增,用ELISA检测IL-1RⅡ蛋白的表达.利用Adeasy XL系统的对照载体pShuttle-CMV-LacZ同上操作作为对照.收集的重组腺病毒感染原代培养的EM基质细胞,并以免疫组化法鉴定IL-1RⅡ表达.结果:测序证实连接后IL-1RⅡ序列完全正确;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;pShuttle-CMV-LacZ转染293细胞3 d后X-gal染色阳性,回收病毒可以重复感染293细胞,ELISA鉴定表达IL-1RⅡ可溶性蛋白,证明病毒包装成功.重组的腺病毒感染EM基质细胞后,免疫组化法证实IL-1RⅡ表达.结论:成功地构建了IL-1RⅡ基因重组腺病毒载体,并且在EM基质细胞中表达,为进一步研究IL-1RⅡ基因在EM中的作用乃至生物治疗都奠定了基础.

关键词：IL-1RⅡ基因、adeasy XL系统、子宫内膜异位症

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：江苏省医学重点学科135基金2003-19

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1102-1105