重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量最高.此蛋白在凝胶上表现为Mr约31 000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白.结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.

关键词：毕赤酵母细胞、酵母载体、可溶性补体受体1、蛋白表达

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：济南军区重点项目02Z27

在线出版日期：2007-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1066-1068