人NR4A1基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

摘要：

目的:克隆人NR4A1基因,构建其重组腺病毒载体.方法:用RT-PCR的方法从人卵巢组织中扩增NR4A1基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdtrack-NR4A1.Pme Ⅰ酶切pAdtrack-NR4A1,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-NR4A1转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒AdCMV-NR4A1后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增.通过GFP报告基因观察重组病毒的产生.PCR、Western blot检测NR4A1基因的表达.结果:用RT-PCR方法,从人卵巢组织中扩增出1 797 bp的cDNA,测序证实为人NR4A1基因.构建了NR4A1基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒.结论:成功地克隆了人NR4A1基因,并构建其重组腺病毒载体,为进一步研究NR4A1基因在相关疾病中的作用奠定了基础.

关键词：腺病毒载体、NR4A1、基因克隆、同源重组

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技部重大科学研究计划项目2006CB944005;国家重点基础研究发展计划973计划2001CB512908

在线出版日期：2007-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1058-1060