抗人木糖基转移酶蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的:制备兔抗人木糖基转移酶(XT-Ⅰ)蛋白的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:应用DNAssist软件分析XT-Ⅰ蛋白的抗原表位,从中选择优势抗原表位,通过引物优化设计,PCR拼接并扩增相应区域DNA片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌ER2566,获得融合表达产物.将纯化的可溶性蛋白GST-XT作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备抗XT-Ⅰ蛋白的多克隆抗体,ELISA间接法测定效价.GST柱亲和层析法纯化抗体,采用Western blot法鉴定该抗体的特异性和生物学活性.结果:确定XT-Ⅰ的N端氨基酸序列QKHQPELAKKPPSRQKELLKRKLEQQEKGKG(175-205)为抗原表位,成功构建了重组表达载体,表达融合蛋白GST-XT,并以其为抗原,免疫新西兰大白兔,制备了抗XT-Ⅰ蛋白的多克隆抗体.ELISA证实其效价高达1∶640 000;Western blot结果显示:该抗体可与人涎腺腺样囊性癌肺转移细胞株ACC-M中表达的XT-Ⅰ蛋白特异性结合.结论:获得具有高特异性的兔抗人XT-Ⅰ蛋白多克隆抗体,为涎腺肿瘤性肌上皮细胞蛋白多糖生物合成的研究提供了特异性抗体.

关键词：人木糖基转移酶、抗体、抗原表位

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：河北省自然科学基金C2006000796

在线出版日期：2007-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1028-1030,1040